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B细胞研究解决方案

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B细胞的分化发育图


 
一、实验前样本制备

 

 


 

 
二、B细胞分选产品

 

 

 
 
分选案例1:human外周血

分选案例2:小鼠脾脏

 
三、流式检测

 


 
四、B细胞分泌的细胞因子定量检测

 


1.B细胞分泌的细胞因子
 

2.CBA原理介绍:

微球免疫分析系统CBA(Cytometric Bead Array)是种结合流式细胞仪荧光检测和微球免疫分析的应用技术。可以轻松地在短时间内,同时检测多种蛋白。其作用原理利用荧光强度不同的微球,上面带有可以辩论特定蛋白的抗体(capture antibody),与样本(例如血清、血浆、培养上清液、细胞裂解液等)及PE检测抗体(detection antibody)作用后,以流式细胞仪进行分析。根据PE荧光强度的不同,用FCAP Array软件进行分析和标准品做对比后,可进行样本内特定蛋白的定性或定量。

 
3.CBA多因子检测产品优点:


样本量少
灵敏度高
实验步骤简便 弹性设计实验 结果分析容易
每次检测仅需25-50μl样本;灵敏度可达0.274pg/ml 时间快速,仅需3-4小时,快速上样 最多可同时测定30种蛋白,实验可重复性高 利用FCAP Array软件,不论样本数目多少,可快速分析完成分析

 
4. CBA产品清单:(ES为高敏试剂盒,检测灵敏度为Fg/ml)
 

 
五、多发性骨髓瘤中浆细胞富集

 


多发性骨髓瘤(Multiple Myeloma,MM),又被称为浆细胞瘤,其特点是高表达浆细胞表面抗原CD138,可通过CD138磁珠富集浆细胞,用于FISH、SNP、PCR、微阵列、蛋白分析、流式检测等下游科研实验,分析多发性骨髓瘤中的浆细胞异常。
 
相关产品推荐:

改善流式实验的利器

 
1. 红细胞裂解液

 

 
Lysis Buffer(10X concentrate)可以裂解HU、NHP、MS、RAT的红细胞,大致可以处理500份样本,使用时稀释成1X,PH值务必调整到7.1-7.4

 
2.FCR阻断剂

 

 
Fc受体是指细胞表面能够与免疫球蛋白(IgG、IgA、IgM、IgE和IgD)结合的分子,其广泛存在于NK细胞、巨噬细胞、中性粒细胞的表面。FcR能够与抗体的Fc段结合,在检查时产生假阳性。使用FcR阻断剂,可以消除假阳性,降低检测背景,获得更清晰的结果。

 
3. 细胞活力染料/ 死活细胞鉴定

 

 
死细胞同样会与抗体产生非特异性结合,造成检测的背景。通常情况,会使用PI或者7-AAD来对死细胞进行染色,但是他们对核酸的结合不够稳定,洗涤会造成假阳性的结果,而且,这两种染料的光谱都非常宽,补偿难以调节,所以在多色检测,尤其是胞内染色时,需要用到可固定的细胞活力染料:Fixable Viability Stain(FVS)Reagents

 
4. 补偿调节微球

 

 
CompBeads是专用于流式细胞仪多色分析的荧光补偿调整微球。它的实用性是在于克服了以往普通的做三色以上的流式分析时补偿难调,耗费样本的缺点。它本省不携带任何荧光,借助于客户自己的特异性荧光抗体孵育结合来调节补偿。它不但能像待测的样本细胞一样在同样的实验条件下固定、破膜等,操作起来很简单,灵敏度高,一致性好,使补偿更轻松更准确,而且最难得的是它最适合于多色分析(如五色、六色、七色等)和复合荧光素(如PE-Cy7、APC-Cy7等),因为这时的补偿往往难度较大。各型号的流式一起均能使用将流式的条件保存,方便下次做同样的荧光染色搭配使用。

 
5. Staining Buffer

 

 
流式染色缓冲液中通常含有BSA或者FBS等成分,可以有效降低染色过程中的非特异性结合。

 
6. 固定剂/ 破膜剂
 

 

 
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